CIMB | Texte intégral gratuit | La molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline augmente au début des lésions cellulaires tubulaires rénales et joue un rôle anti-inflammatoire

Figure 1.
Peroxyde d’hydrogène (H2Ô2) le traitement augmente l’expression de la protéine DICAM dans les cellules HK-2. (un) Des images représentatives de Western blot représentent les niveaux de protéines de DICAM, d’occludine, de lipocaline associée à la gélatinase neutrophile (NGAL) et de GAPDH dans les cellules HK-2 après H.2Ô2 exposition. (b) Quantification du Western blot de (un) révèle des variations significatives dans l’expression des protéines. * p 0,05 et **** p 0,0001 indique une signification statistique. Abréviations : DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; NGAL, lipocaline associée à la gélatinase neutrophile ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

Figure 1.
Peroxyde d’hydrogène (H2Ô2) le traitement augmente l’expression de la protéine DICAM dans les cellules HK-2. (un) Des images représentatives de Western blot représentent les niveaux de protéines de DICAM, d’occludine, de lipocaline associée à la gélatinase neutrophile (NGAL) et de GAPDH dans les cellules HK-2 après H.2Ô2 exposition. (b) Quantification du Western blot de (un) révèle des variations significatives dans l’expression des protéines. * p 0,05 et **** p 0,0001 indique une signification statistique. Abréviations : DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; NGAL, lipocaline associée à la gélatinase neutrophile ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

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Figure 2.
Le traitement aux lipopolysaccharides (LPS) augmente l’expression de la protéine DICAM dans les cellules HK-2. (un) Des images représentatives de Western blot représentent les niveaux de protéines DICAM, occludine, NGAL et GAPDH dans les cellules HK-2 après H2Ô2 exposition. (b) Quantification du Western blot de (un) révèle des variations significatives dans l’expression des protéines. * p 0,05, *** p 0,001, et **** p 0,0001 indique une signification statistique. Abréviations : DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; NGAL, lipocaline associée à la gélatinase neutrophile ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

Figure 2.
Le traitement aux lipopolysaccharides (LPS) augmente l’expression de la protéine DICAM dans les cellules HK-2. (un) Des images représentatives de Western blot représentent les niveaux de protéines DICAM, occludine, NGAL et GAPDH dans les cellules HK-2 après H2Ô2 exposition. (b) Quantification du Western blot de (un) révèle des variations significatives dans l’expression des protéines. * p 0,05, *** p 0,001, et **** p 0,0001 indique une signification statistique. Abréviations : DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; NGAL, lipocaline associée à la gélatinase neutrophile ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

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Figure 3.
Suppression efficace de l’expression DICAM dans les cellules HK-2 à l’aide de DICAM ciblant les siARN. (un) Les conditions de transfection sont établies pour inhiber l’expression de DICAM. Les cellules HK-2 sont transfectées avec du DICAM ciblant les siARN pendant 6 et 24 heures. Une diminution statistiquement significative de l’expression du DICAM est observée à 6 et 24 h. Les résultats démontrent qu’une durée de transfection de 6 h est adéquate pour une suppression substantielle du DICAM. (b) Confirmation de l’inactivation du DICAM après un traitement de 6 h siARN-DICAM à l’aide d’un anticorps DICAM et d’une analyse par Western blot. * p 0,05 indique une signification statistique. Abréviations : siRNA, petit ARN interférent ; Scramble, brouillage (contrôle négatif) ; DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline.

Figure 3.
Suppression efficace de l’expression DICAM dans les cellules HK-2 à l’aide de DICAM ciblant les siARN. (un) Les conditions de transfection sont établies pour inhiber l’expression de DICAM. Les cellules HK-2 sont transfectées avec du DICAM ciblant les siARN pendant 6 et 24 heures. Une diminution statistiquement significative de l’expression du DICAM est observée à 6 et 24 h. Les résultats démontrent qu’une durée de transfection de 6 h est adéquate pour une suppression substantielle du DICAM. (b) Confirmation de l’inactivation du DICAM après un traitement de 6 h siARN-DICAM à l’aide d’un anticorps DICAM et d’une analyse par Western blot. * p 0,05 indique une signification statistique. Abréviations : siRNA, petit ARN interférent ; Scramble, brouillage (contrôle négatif) ; DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline.

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Graphique 4.
Impact de l’inactivation du gène DICAM sur l’expression protéique des marqueurs associés dans H2Ô2-lésion des cellules HK-2 induite. (un) Après l’inactivation du DICAM à l’aide du contrôle siRNA et du siRNA DICAM, les niveaux de protéines d’occludine, d’intégrine β1, d’intégrine β3, NOX4, IL-1β et GAPDH ont été évalués 2 et 4 h après H.2Ô2 traitement. (b) Analyse quantitative des niveaux d’expression des protéines. (c) Des marqueurs antioxydants, notamment la catalase, SOD1, SOD2 et le marqueur de stress oxydatif NOX4, ont été analysés à l’aide de RT-qPCR en temps réel. * p 0,05 et ** p 0,01 indique une signification statistique. Abréviations : siRNA, petit ARN interférent ; Scramble, brouillage (contrôle négatif) ; DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; NOX4, NADPH oxydase 4 ; IL-1β, interleukine-1 bêta ; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-6, interleukine 6 ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

Graphique 4.
Impact de l’inactivation du gène DICAM sur l’expression protéique des marqueurs associés dans H2Ô2-lésion des cellules HK-2 induite. (un) Après l’inactivation du DICAM à l’aide du contrôle siRNA et du siRNA DICAM, les niveaux de protéines d’occludine, d’intégrine β1, d’intégrine β3, NOX4, IL-1β et GAPDH ont été évalués 2 et 4 h après H.2Ô2 traitement. (b) Analyse quantitative des niveaux d’expression des protéines. (c) Des marqueurs antioxydants, notamment la catalase, SOD1, SOD2 et le marqueur de stress oxydatif NOX4, ont été analysés à l’aide de RT-qPCR en temps réel. * p 0,05 et ** p 0,01 indique une signification statistique. Abréviations : siRNA, petit ARN interférent ; Scramble, brouillage (contrôle négatif) ; DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; NOX4, NADPH oxydase 4 ; IL-1β, interleukine-1 bêta ; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-6, interleukine 6 ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

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Graphique 5.
Impact de l’inactivation du gène DICAM sur l’expression protéique des marqueurs associés dans les lésions cellulaires HK-2 induites par le LPS. (un) Après l’inactivation du DICAM à l’aide du contrôle siARN et du siARN DICAM, les niveaux de protéines d’occludine, d’intégrine β1, d’intégrine β3, de TNF-α, d’IL-1β et de GAPDH ont été évalués 2 et 4 h après le traitement au LPS. (b) Analyse quantitative des niveaux d’expression des protéines. * p 0,05 indique une signification statistique. Abréviations : siRNA, petit ARN interférent ; Scramble, brouillage (contrôle négatif) ; DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; IL-6, interleukine 6 ; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-1β, interleukine-1 bêta ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

Graphique 5.
Impact de l’inactivation du gène DICAM sur l’expression protéique des marqueurs associés dans les lésions cellulaires HK-2 induites par le LPS. (un) Après l’inactivation du DICAM à l’aide du contrôle siARN et du siARN DICAM, les niveaux de protéines d’occludine, d’intégrine β1, d’intégrine β3, de TNF-α, d’IL-1β et de GAPDH ont été évalués 2 et 4 h après le traitement au LPS. (b) Analyse quantitative des niveaux d’expression des protéines. * p 0,05 indique une signification statistique. Abréviations : siRNA, petit ARN interférent ; Scramble, brouillage (contrôle négatif) ; DICAM, molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; IL-6, interleukine 6 ; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-1β, interleukine-1 bêta ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

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Graphique 6.
Modification de l’expression protéique des marqueurs associés dans les lésions cellulaires HK-2 induites par le LPS suite à la surexpression de DICAM. (un) Vérification de la surexpression de DICAM après un traitement avec l’adénovirus DICAM, comme le montre l’analyse par Western blot. (b) Suite à la surexpression de DICAM avec l’adénovirus DICAM, les cellules ont été exposées au LPS pendant 4 et 24 h. Un Western blot ultérieur a été réalisé, en utilisant des anticorps ciblant l’occludine, l’intégrine β1, l’intégrine β3, le TNF-α, l’IL-6, l’IL-8 et le GAPDH. (c) Évaluation quantitative des modèles d’expression des protéines présentés dans le panel (b). * p 0,05, ** p 0,01, et *** p 0,001 indique une signification statistique. Abréviations : Ad-GFP, adénovirus exprimant la protéine fluorescente verte ; Ad-DICAM, adénovirus exprimant une molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-6, interleukine 6 ; IL-1β, interleukine-1 bêta ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

Graphique 6.
Modification de l’expression protéique des marqueurs associés dans les lésions cellulaires HK-2 induites par le LPS suite à la surexpression de DICAM. (un) Vérification de la surexpression de DICAM après un traitement avec l’adénovirus DICAM, comme le montre l’analyse par Western blot. (b) Suite à la surexpression de DICAM avec l’adénovirus DICAM, les cellules ont été exposées au LPS pendant 4 et 24 h. Un Western blot ultérieur a été réalisé, en utilisant des anticorps ciblant l’occludine, l’intégrine β1, l’intégrine β3, le TNF-α, l’IL-6, l’IL-8 et le GAPDH. (c) Évaluation quantitative des modèles d’expression des protéines présentés dans le panel (b). * p 0,05, ** p 0,01, et *** p 0,001 indique une signification statistique. Abréviations : Ad-GFP, adénovirus exprimant la protéine fluorescente verte ; Ad-DICAM, adénovirus exprimant une molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-6, interleukine 6 ; IL-1β, interleukine-1 bêta ; GAPDH, glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase.

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Graphique 7.
Un résumé des résultats de la présente étude. LPS ou H2Ô2 les blessures ont induit une expression accrue de DICAM dans les cellules épithéliales tubulaires proximales humaines. L’augmentation du DICAM a supprimé l’expression des cytokines inflammatoires telles que le TNF-α, l’IL-6 et l’IL1β. Lorsque le DICAM a été renversé et exposé à H2Ô2 blessure, la réponse inflammatoire était augmentée dans les cellules tubulaires proximales. Abréviations : molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; LPS, lipopolysaccharide ; H2Ô2, peroxyde d’hydrogène; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-6, interleukine 6 ; IL-1β, interleukine-1 bêta.

Graphique 7.
Un résumé des résultats de la présente étude. LPS ou H2Ô2 les blessures ont induit une expression accrue de DICAM dans les cellules épithéliales tubulaires proximales humaines. L’augmentation du DICAM a supprimé l’expression des cytokines inflammatoires telles que le TNF-α, l’IL-6 et l’IL1β. Lorsque le DICAM a été renversé et exposé à H2Ô2 blessure, la réponse inflammatoire était augmentée dans les cellules tubulaires proximales. Abréviations : molécule d’adhésion cellulaire contenant un double domaine d’immunoglobuline ; LPS, lipopolysaccharide ; H2Ô2, peroxyde d’hydrogène; TNF-α, facteur de nécrose tumorale-α ; IL-6, interleukine 6 ; IL-1β, interleukine-1 bêta.

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